DB35/T 1233—2011 測定待測菌種3次，每次3個重復，若萌發時間或生長速度比正常菌種延長2倍以上，判定待測菌種 活力減弱。 4.5.2 搔菌法檢測 4.5.2

DB35/T 1233—2011 

                     食用菌菌種活力檢測技術規范 

1  范圍 

   本標準規定了食用菌菌種活力檢測技術規范的感官評定、細胞核數量檢測、溫度脅迫萌發檢測、菌
絲再生能力檢測評價食用菌菌種活力的方法。 
   本標準適用于香菇、毛木耳、黑木耳、金針菇、杏鮑菇、真姬菇、雙孢蘑菇、草菇、雞腿菇的母種、
原種和栽培種。 

2  規范性引用文件 

    下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 
   GB/T 12728-2006 食用菌術語 
   GB/T 19171 雙孢蘑菇菌種 
   GB/T 23599  草菇菌種 
   NY/T 1846-2010 食用菌菌種檢驗規程 

3  術語和定義 

    下列術語和定義適用于本標準。 

3.1   

    菌種活力 

    菌種的生長、繁殖能力。 

3.2   

    高溫脅迫  

   過高溫度對生物體所處的生存狀態產生的生理機能代謝下降。 

3.3   

   插片法 

   采用平皿培養菌絲，在菌絲還未萌發時將滅菌的蓋玻片與培養基表面成30度角傾斜插入離菌種塊約
1cm處的培養基中，待菌絲生長至蓋玻片約1/3處時，拔出蓋玻片，反面放置載玻片上觀察，從而獲得可
以在顯微鏡上觀察菌絲生長脈絡的一種真菌菌絲顯微制片方法。 

3.4   

    高溫抑制線 
DB35/T 1233—2011 

    食用菌菌種在生產過程中受高溫的不良影響，培養物部分區域呈現發黃、發暗或菌絲變稀弱的現象
與正常菌絲出現的明顯界線。

3.5   

    壁料分離 

    菌種培養基因收縮而導致與試管壁、菌種瓶、塑料袋等容器壁分開的現象。

3.6   

    最高溫度 

    食（藥）用菌生長發育溫度范圍的上限。 

4  方法與步驟 

4.1  抽樣 

    按“NY/T 1846-2010”中5.1和5.2進行抽樣。 

4.2  感官評定 

4.2.1  母種 

    母種出現下列情況之一，判定菌種活力已減弱： 
    a) 斜面培養基干縮，出現質壁分離； 
    b) 菌絲明顯變色或出現暗斑。 

4.2.2  原種與栽培種 

    原種與栽培種出現下列情況之一，判定菌種活力已減弱： 
    a) 菌絲明顯變色，菌種變軟、大量吐黃水； 
    b) 出現壁料分離； 
    c) 產生高溫抑制線； 
    d) 菌種明顯失水變輕。 

4.3  細胞核數量檢測 

4.3.1  適宜的食用菌品種 

    本檢測適用于草菇。 

4.3.2  細胞核數量測定 

    采用插片法培養獲取待觀察菌絲。無菌條件下，在距待測母種接種塊1cm～2cm處，原種或栽培種的
中央位置，挑取大小約0.5cm×0.5cm×0.5cm的菌絲塊，轉接至平板PDA培養基中央（當待測菌種為母種
時，接種塊的菌絲面朝上），于菌種最適宜的溫度下培養。 
    取出帶菌絲的蓋玻片，滴一滴DAPI（4’,6-聯脒-2-苯基吲哚二鹽酸鹽）染料至載玻片中，并反向蓋
上帶菌絲的蓋玻片，熒光顯微鏡下隨機選取50個視野觀察，每個視野隨機選1個完整細胞進行細胞核數
量測定，并做好記錄。  

  2 
                                                              DB35/T 1233—2011 

4.3.3  活力評價 

4.3.3.1  測定正常菌種菌絲細胞的平均細胞核數量，作為參考系。 
4.3.3.2  重復計數 3次，并與正常菌種進行統計分析，如待測菌種菌絲細胞的平均細胞核數量顯著低
于正常菌種，說明該菌種活力減弱。 

4.4  高溫脅迫萌發檢測 

4.4.1  處理溫度的設定 

    處理溫度等于最高溫度減去2℃。 

4.4.2  實驗步驟 

4.4.2.1  取待測菌種，挑取大小約 0.5cm×0.5cm×0.5cm的菌絲塊，轉接至 PDA平板培養基中央，于
處理溫度下放置 1 個小時。 

4.4.2.2  待測菌種取樣位置，母種為距接種塊 1cm～2cm處，原種或栽培種為菌種瓶的中央位置，若待
測菌種為母種，接種塊的菌絲面朝上。 

4.4.2.3  將處理好的平皿放置菌株最適培養溫度培養，每隔 2 小時～3 小時觀察一次。 

4.4.3  活力評價 

   測定待測菌種3次，每次3個重復，若萌發時間比正常菌種延長2倍以上，判定待測菌種活力減弱。 

4.5  菌絲再生能力檢測 

4.5.1  栽培基質中菌絲再生能力檢測 

4.5.1.1  培養基 

4.5.1.1.1  木生菌 

   雜木屑（細）78％、麥麩 20％、糖1％、石膏 1%，含水量 58%-62%，pH 值自然。 

4.5.1.1.2  草生菌 

   草菇培養基按“GB/T 23599—2009”中 A.2.2的草菇培養基配方，雙孢蘑菇的按照“GB 19171—2003” 
中B.2.1的雙孢蘑菇培養基配方。 

4.5.1.2  實驗步驟 

4.5.1.2.1  取待測菌種，挑取大小約 0.5cm×0.5cm×0.5cm的菌絲塊，轉接至裝培養料試管上表面中
央，于最適的溫度下培養。 

4.5.1.2.2  按本標準 4.4.2.2 進行。 

4.5.1.2.3  記錄萌發時間，當菌絲長至 1cm～2cm 時，在菌絲前緣畫線作為生長起始線，記錄時間。 

4.5.1.2.4  畫線后放回培養，當菌絲生長最快的試管即將長滿時，在菌絲前緣畫終止線，記錄時間，
測量起始線與終止線之間的距離，計算菌絲生長速度。 

4.5.1.3  活力評價 

                                                                          3 
DB35/T 1233—2011 

    測定待測菌種3次，每次3個重復，若萌發時間或生長速度比正常菌種延長2倍以上，判定待測菌種
活力減弱。 

4.5.2  搔菌法檢測 

4.5.2.1  實驗步驟 

    取待測菌種，按無菌操作要求，用接種鏟或接種耙搔除菌種表面（母種斜面、原種或栽培種瓶袋料
面）一薄層培養基，塞回棉花塞，放于適宜的溫度下培養，觀察其萌發出新菌絲的能力。 

4.5.2.2  活力評價 

    按本標準4.4.3進行。