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    食用菌菌種生產技術規程

    來源:     時間:2014年12月4日9:54    瀏覽數:
    食用菌菌種生產技術是否規范直接影響菌種的質量,從而影響食用菌產品的質量。我國食用菌菌種生產采用母種、原種、栽培種的三級繁育程序。為了實現食用菌菌種生產技術規范化,確保菌種質量,維護菌種生產者、經營者和使用者的合法權益,特制定本標準。

    本標準的附錄A、附錄B均為規范性附錄。
      本標準由農業部種植業管理司提出。
      本標準起草單位:中國微生物菌種保藏管理委員會農業微生物中心、中國農業科學院土壤肥料研究所、農業部食用菌產品質量監督檢驗測試中心(上海)。
    本標準主要起草人:張金霞、賈身茂、王南、左雪梅、申進文。
                     食用菌菌種生產技術規程
    1. 范圍
      本標準規定了各種食用菌各級菌種生產的生產場地、廠房設置和布局、設備設施、使用品種、生產工藝流程、技術要求和貯存運輸要求。
      本標準適用于各種各級食用菌菌種生產。
      2. 規范性引用文件
    下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標準。
    GB 4789.28---1994 食品衛生微生物學檢驗 染色法、培養基和試劑
    GB 9387--1988 食品包裝用聚乙烯成型品衛生標準
    GB 9688—1988 食品包裝用聚丙烯成型品衛生標準
    3. 術語和定義  下列術語和定義適用于本標準。
      3.1 品種strain
      經各種方法分離、誘變、雜交、篩選而選育出來具特異性、均一(一致)性和穩定性的具有同一個祖先的群體。也常稱作菌株或品系。
      3.2菌種pure culture
      經人工培養并可供進一步繁殖或栽培使用的食用菌菌絲純培養物,包括母種、原種和栽培種。
      3.3母種 stock culture
      經各種方法選育得到的具有結實性的菌絲體純培養物及其繼代培養物,以玻璃試管為培養容器和單位,也稱一級種、試管種。
      3.4原種pre-culture spawn
      由母種移植、擴大培養而成的菌絲體純培養物。常以玻璃菌種瓶或塑科菌種瓶或15 cm×28 cm聚丙烯塑料袋為容器。
      3.5栽培種spawn 由原種移植、擴大培養而成的菌絲體純培養物。常以玻璃瓶、塑料瓶或塑料袋為容器。栽培種只能用于栽培,不可再次擴大繁殖菌種。
      3.6 種木wood-pieces
      木塞種用的具一定形狀和大小的木質顆粒,也稱種粒。
      3.7 固體培養基solid medium
      以富含木質纖維素或淀粉類天然碳源物質為主要原料,填加適量的有機氮源和無機鹽類,具一定水分含量的培養基。常用的主要原料有木屑、棉籽殼、秸稈、麥粒、谷粒、玉米粒等,常用的有機氮源有麥麩、米糠等,常用的無機鹽類有硫酸鈣、硫酸鎂、磷酸二氫鉀等。固體培養基包括以闊葉樹木屑為主要原料的木屑培養基、以草本植物為主要原料的草料培養基、以禾谷類種子為主要原料的谷粒培養基、以腐熟料為原料的糞草培養基,以種木為主要原料的木塞培養基。
      3.8 種性 characters of strain
      食用菌的品種特性,是鑒別食用菌菌種或品種優劣的重要標準之一。一般包括對溫度、濕度、酸堿度、光線和氧氣的要求,抗逆性、豐產性、出菇遲早、出菇潮數、栽培周期、商品質量及栽培習性等農藝性狀。
      4.技術要求
      4.1 技術人員 菌種廠應有與菌種生產所需的相應專業技術人員.
      4.2 場地選擇
      4.2.1基本要求 地勢高燥,通風良好。排水暢通,交通便利。
      4.2.2 環境衛生要求
      至少300m之內無禽畜舍,無垃圾(糞便)場,無污水和其他污染源(如大量揚塵的水泥廠、磚瓦廠、石灰廠、木材加工廠等)。
      4.3 廠房設置和布局
      4.3.1 廠房設置和建造
      有各自隔離的攤曬場、原材料庫、配料分裝室(場)、滅菌室、冷卻室、按種室、培養室、貯存室、菌種檢驗室等。廠房建造從結構和功能上滿足食用菌菌種生產的基本需要。
      4.3.1.1 攤曬場
      要求平坦高燥、通風良好,光照充足、空曠寬闊、遠離火源。
      4.3.1.2 原材料庫 要求高燥、通風良好,防雨、遠離火源。
      4.3.1.3 配料分裝室(場)
      要求水電方便,空間充足。如安排在室外,應有天棚,防雨防曬。
      4.3.1.4 滅菌室
      要求水電安全方便,通風良好,空間充足,散熱暢通。
      4.3.1.5 冷卻室 潔凈、防塵、易散熱。
      4.3.1.6 接種室
      要設緩沖間,防塵換氣性能良好,內壁和屋頂光滑,經常清洗和消毒。做到空氣潔凈。
      4.3.1.7 培養室和貯存室
      內壁和屋頂光滑,便于清洗和消毒。培養室和貯存室墻壁要加厚,利于控溫。
      4.3.1.8 菌種檢驗室 水電方便,利于裝備相應的檢驗設備和儀器。
      4.3.2布局 應按菌種生產工藝流程合理安排布局。
      4.4 設備設施
      4.4.1 基本設備 磅秤、天平、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、凈化工作臺、接種箱、調溫設備、除濕機、培養架、恒溫箱、冰箱、顯微鏡等及常規用具,產量大的菌種廠還應配備攪拌機、裝瓶裝袋機。高壓滅菌鍋應使用經有關部門檢驗的安全合格產品。
      4.4.2 基本設施
      配料、分裝、滅菌、冷卻、接種、培養等各環節的設施規模要配套。冷卻室、按種室、培養室和貯存室都要有調溫設施。
      4.5 使用品種
      4.5.1 品種
      應使用經省級以上農作物品種審定委員會登記的品種,并且清楚種性。不應使用來源和種性不清的菌種和生產性狀未經系統試驗驗證的組織分離物作種源生產菌種。并從具相應技術資質的供種單位引種。
      4.5.2 移植擴大
      母種僅用于移植擴大原種,一支母種移植擴大原種不應超過6瓶(袋);一瓶原種移植擴大栽培種不應超過50瓶(袋)。
      4.6 生產工藝流程
      培養基配制→分裝→滅菌→冷卻→接種→培養(檢查)→成品
      4.7 生產過程中的技術要求
      4.7.1 容器
      4.7.1.1 母種
      使用玻璃試管和棉塞,試管18 mm×180 mm或20mm×200mm,棉塞要使用梳棉,不應使用脫脂棉。
       4.7.1.2 原種
      使用650 mL-750 ml,耐126℃高溫的無色或近無色的玻璃菌種瓶,或850 ml耐126℃高溫白色半透明符合GB 9687衛生規定的塑料菌種瓶,或15cm×28cm耐126℃高溫符合GB 9688衛生規定的聚丙烯塑料袋。各類容器部應使用棉塞,棉塞應符合4.7.1.1規定;也可用能滿足濾菌和透氣要求的無棉塑料蓋代替棉塞。
      4.7.1.3 栽培種
      使用符合4.7.1.2規定的容器,也可使用≤17 cm×35 cm耐126℃高溫符合GB 9688衛生規定的聚丙烯塑料袋。各類容器都應使用棉塞或無棉塑料蓋,并符合4.7.1.2規定。
      4.7.2 培養原料
      4.7.2.1 化學試劑類
      這類原料如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等,要使用化學純級試劑。
      4.7.2.2 生物制劑和天然材料類
      生物制劑如酵母粉和蛋白胨,天然材料如木屑、棉籽殼、麥麩等,要求新鮮、無蟲、無螨、無霉、潔凈干燥。
      4.7.3培養基配方
      4.7.3.1 母種培養基 一般使用附錄A中第A.1章規定的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)或第A.2章規定的綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(CPDA),特殊種類需加入其生長所需特殊物質,如酵母粉、蛋白胨、麥芽汁、麥芽糖等,但不應過富。嚴格掌握PH值。
      4.7.3.2 原種和栽培種培養基
      根據當地原料資源和所生產品種的要求,使用適宜的培養基配方(見附錄B),嚴格掌握含水量和PH值。
      4.7.4 分裝
      母種培養基的分裝量掌握在試管長度的四分之一至五分之一,滅菌后擺放成的斜面頂端距試管口不少于50mm,原種和栽培種培養基裝至距瓶(袋)口不少于60 mm,滅菌后不少于45 mm。棉塞大小松緊要適度。原種和栽培種培養基的松緊度要一致。
       4.7.5 滅菌
      母種的培養基配制分裝后應立即滅菌;原種和栽培種培養基配制后應在4 h內進鍋滅菌。母種培養基滅菌0.11 Mpa—0.12 Mpa,30min,木屑培養基和草料培養基滅菌0.12 MPa,1.5 h或0.14 MPa—0.15 MPa,1h,谷粒培養基、糞草培養基和木塞培養基滅菌0.14 MPa—0.15 MPa,2.5 h。裝容量較大時,滅菌時間要適當延長。滅菌完畢后,應自然降壓,不應強制降壓。常壓滅菌時,在2 h之內使滅菌室溫度達到100℃,保持100℃8 h—10 h。母種培養基、原種培養基、谷粒培養基、糞草培養基和木塞培養基,應高壓滅菌,不應常壓滅菌。滅菌時應防止棉塞被冷凝水打濕。
      4.7.6 滅菌效果的檢查
      母種培養基置于28℃恒溫培養,原種和栽培種培養基經無菌操作接種于GB 4789.28--1994中  4.8規定的營養肉湯培養基中,于28℃恒溫培養,48 h后檢查,無微生物長出的為滅菌合格。
      4.7.7 冷卻
      冷卻室使用前要進行清潔和除塵處理。地面鋪消毒過的塑料薄膜后,將滅菌后的原種瓶(袋)或栽培種瓶(袋)放置在冷卻室中冷卻到料溫降至適宜溫度。
      4.7.8 接種
      4.7.8.1 接種室(箱)的基本處理程序
      清潔→搬入接種物和被接種物→接種室(箱)的消毒處理。
      4.7.8.2 接種室(箱)的消毒方法
      用藥物消毒并用紫外燈照射。
      4.7.8.3 凈化工作臺的消毒處理方法
      先用75%酒精或新潔爾滅溶液進行表面擦拭消毒,然后預凈20min。
      4.7.8.4 接種操作
    在無菌室(箱)或凈化工作臺上嚴格按無菌操作接種。接種完成后及時貼好標簽。
      4.7.8.5 接種室(箱)后處理
      接種室每次使用后,要及時清理清潔,排除廢氣,清除廢物,臺面要用75%酒精或新潔爾滅溶液擦試消毒。
      4.7.9培養室處理
    在使用培養室的前兩天,采用藥物消毒。
      4.7.10培養條件
      根據培養物的不同生長要求,給予其適宜的培養溫度(多在22℃--28℃),保持空氣相對濕度在75%以下,通風,避光。
      4.7.11培養期的檢查
      各級菌種培養期間應定期檢查,及時揀出不合格菌種。
      4.7.12入庫 完成培養的菌種要及時登記入庫。
      4.7.13記錄 生產各環節應詳細記錄。
      4.7.14 留樣
      各級菌種都應留樣備查,留樣的數量應以每個批號母種3—5支,原種和栽培種5—7瓶(袋),于4℃--6℃下貯存,貯存至使用者在正常生產條件下該批菌種出第一潮菇(耳)。
                                           附錄A
        (規范性附錄)
      母種常用培養甚及其配方
      A.1 PDA培養基(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基)
      馬鈴薯200 g(用浸出汁),葡萄糖20g,瓊脂20g,水1000mL,PH值自然。
      A.2 CPDA培養基(綜臺馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基)
      馬鈴薯200g(用浸出汁),葡萄糖20g,磷酸二氫鉀2g,硫酸鎂0.5g,瓊脂20g,水1000 mL,pH值自然。
                                           附錄B
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      原種和栽培種常用培養基配方及其適用種類
      B.1 以木屑為主料的培養基配方
      見B.1.1、B.1.2、B.1.3,適用于香菇、黑木耳、毛木耳、平菇、金計菇、滑菇、雞腿菇、真姬菇等多數木腐菌類。
      B.1.1 闊葉樹木屑78%,麩皮20%,糖1%,石膏1%,含水量58%士2%。
      B.1.2 闊葉樹木屑63%,棉籽殼15%,麩皮20%,糖1%,石膏1%,含水量58%土2%。
    B.1.3 闊葉樹木屑63%,玉米芯粉15%,麩皮20%,糖1%,石膏1%,含水量58%土2%。
      B.2 以棉籽殼為主料的培養基
      見B.2.1、B.2.2、B.2.3、B.2.4,適用于黑木耳、毛木耳、金針菇、滑菇、真姬菇、楊樹菇、雞腿菇、側耳屬等多數木腐菌類。
      B.2.1 棉籽殼99%,石膏1%,含水量60%土2%。
      B.2.2 棉籽殼84%一89%,麥麩l0%一15%,石膏1%,含水量60%士2%。
      B.2.3 棉籽殼54一69%,玉米芯20%一30%,麥麩l0%—15%,石膏1%,含水量60%土2%。
      B.2.4 棉籽殼54%一69%,闊葉樹木屑20%—30%,麥麩10%—15%,石膏1%,含水量60%士2%。
      B.3 以棉籽殼或稻草為主的培養基
      見B3.1、B3.2、B.3.3適用于草菇。
      B.3.1 棉籽殼99%,石灰1%,含水量68%土2%。
      B.3.2 棉籽殼84%—89%,麥麩10%—15%,石灰1%,含水量68%土2%。
      B.3.3 棉籽殼44%,碎稻草40%,麥麩15%,石灰1%,含水量68%土2%。
      B.4 腐熟料培養基
      適用于雙孢蘑菇、大肥菇、姬松茸等蘑菇屬的種類。
      B.4.1 腐熟麥秸或稻草(干)77%,腐熟牛糞粉(干)20%,石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量62%土1%,PH7.5。
      B.4.2 腐熟棉籽殼(干)97%,石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量55%土1%,PH7.5。
      B.5 谷粒培養基
      小麥、谷子、玉米或高梁97%一98%,石膏2%一3%,含水量50%±1%,適用于雙孢蘑菇、大肥菇、姬松茸等蘑菇屬的種類,也可用于側耳屬各種和金針菇的原種。
      B.6 以種木為主料的培養基
      闊葉木種木70%—75%,附錄B.l.l配方的培養基25%一30%。

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